کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل


 

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کاملکلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

لطفا صفحه را ببندید کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

لطفا صفحه را ببندید

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

لطفا صفحه را ببندید

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

لطفا صفحه را ببندید

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

لطفا صفحه را ببندید

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

لطفا صفحه را ببندید

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

لطفا صفحه را ببندید

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

 

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کاملکلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

لطفا صفحه را ببندید کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

لطفا صفحه را ببندید

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

لطفا صفحه را ببندید

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

لطفا صفحه را ببندید

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

لطفا صفحه را ببندید

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

لطفا صفحه را ببندید

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

لطفا صفحه را ببندید

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل

کلیه مطالب این سایت فاقد اعتبار و از رده خارج است. تعطیل کامل




جستجو


 



جدول ۴- ۱۶ مدل اصلی رگرسیون چندگانه برای هر یک از متغیرها

( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

a- متغیر وابسته: تعهدسازمانی
بر اساس نتایج جدول ۴-۱۶، ستون B برای پیش بینی تعهدسازمانی استفاده می شود. همچنین مقدار t تک تک ضرایب مذکور نیز محاسبه شده که نشان می دهد بجز متغیرهای روحیه رقابت، علاقه مندی، نفوذ و تولید، اثر سایر متغیرها بر تعهدسازمانی معنی دار است. ضریب بتا نیز برای پیش بینی استفاده می شود و نشان دهنده اهمیت هر یک از متغیرهای جوّ سازمانی در پیش بینی تعهدسازمانی است. همانطور که مشاهده می شود، مقدار این ضریب برای مولفه مزاحمت(۲۹۵/۰) است و سهم بیشتری در بین متغیرها در تغییرات تعهدسازمانی داشته است. زیرا یک واحد تغییر در انحراف معیار این متغیر، موجب ۲۹۵/۰ واحد تغییر در متغیر وابسته می‌شود. متغیرهای ملاحظه گری نیز با ۱۷۱/۰، صمیمیت با ۱۴۲/۰ و فاصله گیری با ۱۱۲/۰ در مرتبه بعدی اهمیت قرار دارد. مدل ترسیم مسیر برای رابطه این متغیرها در نمودار ۴-۱۲دیده می شود.
نمودار ۴- ۱۱ میزان اهمیت هر یک از مولفه های جو سازمانی در پیش¬بینی تعهدسازمانی
مزاحمت
فاصله‌گیری
صمیمیت
تعهدسازمانی
ملاحظه‌گری
۲۹۵/۰
۱۴۲/۰
۱۷۱/۰
۱۱۲/۰
۴-۴-۳- تجزیه و تحلیل داده های مربوط به سوال سوم تحقیق
– آیا بین تعهد سازمانی و خودکارآمدی کارکنان رابطه معنی­داری وجود دارد ؟

مدل

R

R2

R2 اصلاح شده

خطای استاندارد برآورد

۱

.۵۵۳( a )

.۳۰۶

.۲۹۹

۷٫۱۵۵۹۳

جدول ۴- ۱۷ خلاصه مدل رگرسیون برای مولفه های تعهدسازمانی و خودکارآمدی
a پیش بینی کننده ها: (مقدار ثابت) تعهد عاطفی- هنجاری و مستمر
محاسبه رگرسیون با روش ورود همزمان نشان می دهد که ضریب تعیین (R2) برابر ۳۰۶/۰ می‌باشد. این مقدار بیانگر آن است که ۶/۳۰ درصد تغییرات خودکارآمدی به مولفه های تعهد سازمانی مربوط می شود و بقیه (۹/۷۸%)به عوامل دیگر مربوط می شود. همچنین با لحاظ درجه آزادی و مقدار ضریب اصلاح شده برابر با ۲۹۹/۰می باشد و نشان می دهد که تعهدسازمانی ۹/۲۹ درصد تغییرات خودکارآمدی را توضیح می دهد و بقیه (۱/۷۰ درصد) ناشی از عوامل دیگر است. علاوه بر آن ضریب همبستگی چندگانه بین این متغیرها ۵۵۳/۰ می باشد که شدّت همبستگی بین مؤلفه های تعهد سازمانی و خودکارآمدی را نشان می دهد. برای اینکه معنی دار بودن این ضریب مشخص شود از آزمون F استفاده شده است که داده های آن در جدول ۴- ۱۷ آمده است.

موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت
[یکشنبه 1401-04-05] [ 10:54:00 ب.ظ ]




وجود خونریزی در قبل عمل

ندارد

۱

۰

۱

دارد

۳

۱۱

۱۴

جمع

۴

۱۱

۱۵

نتیجه آزمون مک نمار p=0.250

در جدول بالا مشاهده می گردد در قبل عمل ۱۴ مورد خونریزی مشاهده شده است که این عدد در بعد عمل به عدد ۱۱ کاهش یافته است و واضح است که میزان خونریزی مشاهده شده ۴/٢۱درصد کاهش داشته است اما این میزان کاهش معنی دار نبوده است(٢۵۰/۰p=)
فصل چهارم:
بحث
همان گونه که پیش تر گفتیم٬استخوان خود فرد به دلیل دارا بودن خاصیت استئواینداکتیو و نیز فاکتورهای رشدی٬بهترین جایگزین برای پرکردن نواقص استخوانی کوچک اطراف ایمپلنت ٬در مقایسه با آلوگرفت ها و زنوگرفت ها باشد.

( اینجا فقط تکه ای از متن فایل پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

به کارگیری گرفت استخوانی اتوژن٬تکنیکی روتین جهت به دست آوردن استخوان به میزان کم در محل هدف می باشد.برای این امر٬چندین محل دهنده ی گرفت استخوانی داخل دهانی وجود دارد.
بر اساس میزان و کیفیت استخوان مورد نیاز٬ از منابع گوناگون داخل دهانی استفاده می شود.در مواردی که نیازمند استخوان به مقدار کم باشیم٬ استخوان ناحیه ی توبروزیته٬ مورد توجه قرار می گیرد.
باتوجه به مجاورت توبروزیته با مولر دوم ماگزیلا٬احتمال آسیب به این دندان٬مورد توجه قرار می گیرد٬لذا ما برآن شدیم تا عوارض و صدماتی که می تواند حین انجام این عمل برای بافت های پریودنتال مجاور ناحیه ی توبروزیته٬که منظور مولر دوم است٬ایجاد کند را مورد ارزیابی قرار داده و براساس میزان سود یا زیانی که در قبال برداشت این گرفت حاصل می شود٬در مورد قطعیت به کارگیری این روش در جراحی های بعدی تصمیم بگیریم.
در این مطالعه ارزیابی مشکلات پریودنتال در دیستال مولر دوم بعد از برداشت گرفت استخوان از ناحیه ی توبروزیته به صورت مطالعه ای مقطعی٬برروی ۱۵بیمار کاندید دریافت این نوع پیوند٬انجام گرفت.
عمق پاکت(PD)٬شاخص پلاک(PI)٬شاخص از دست دادن چسبندگی لثه(AL)٬شاخص لثه(GI)و شاخص خونریزی بعد از پروب کردن(BOP) از جمله شاخص های ارزیابی بیماری پریودنتیت است که در این مطالعه در دو زمان قبل و ۶ماه بعد از عمل انجام گرفت.
بر اساس متغیر ها و شاخص های مورد مطالعه ی ما٬عمق پاکت٬از دست رفتن چسبندگی لثه٬شاخص لثه و شاخص پلاک٬بعد از گذشت ۶ماه از انجام جراحی برداشت گرفت استخوانی از ناحیه ی توبروزیته ی فک بالا٬به طور معنی داری کاهش یافتند که این نتایج مارا در استفاده از این منبع تهیه ی گرفت استخوانی اتوژن٬در نواحی که دچار نقص های استخوانی کوچک و نیازمند این پیوند استخوانی است٬رهنمون می کند.
هرچند که در مطالعه ی ما٬کاهش شاخص خونریزی بعد از گذشت ۶ماه از جراحی٬معنی دار نبوده است (٢۵۰/۰P=)٬اما باید درنظر داشت که این یافته ها از لحاظ آماری چنین ارزیابی می شوند درصورتی که از لحاظ کلینیکی هیچ گونه مشکلی در میزان BOP این دندان ها دیده نشده است.بااین حال می توان با برنامه ریزی هرچه بهتر در زمینه ی ایجاد بهداشت دهانی خوب٬از قبل از انجام جراحی و کنترل های بیشتر و دوره ای٬برای بعد از جراحی٬بیمار را برای برداشت هرچه بهتر پلاک٬طی روش های نوین بهداشت دهان٬راهنمایی کرد تا مکان جراحی از هرگونه تجمع پلاک عاری شود واین شاخص هم مانند سایر شاخص های مورد مطالعه ی ما٬کاهش معنی داری بیابد.
با توجه به این که طبق گزارشات٬رعایت اصول حذف پلاک و داشتن بهداشت دهانی مطلوب توسط بیماران٬موجب بهبود معنی داری در شاخص های ارزیابی بیماری پریودنتیت شده است که نشان دهنده ی بهبود کلی وضعیت بیماری است و از طرفی٬علت خونریزی لثه در این بیماران نیز به دلیل فعال بودن بیماری می باشد٬منطقی به نظر می رسد که با بهبود بیماری٬درصد خونریزی لثه نیز کاهش معنی داری یابد.
یافته های مطالعه ی ما نشان داد که شاخص های مورد بررسی وضعیت پریودنتال در زمان ۶ ماه بعد از عمل٬نه تنها بدتر نشده اند بلکه اکثر آنها به طور معنی داری بهبود یافته اند.
با توجه به مداخله ی انجام شده و احتمال تغییر عادات بهداشتی بیماران پس از جراحی که می تواند در نتیجه ی قرار دادن ایمپلنت های دندانی باشد٬این نتایج قابل توجیه است.
در مطالعه آینده نگری که آقای Kugelberg و همکارانش در مورد نواقص داخل استخوانی در سطح دیستال مولر دوم٬بعد از حذف مولر سوم نهفته انجام دادند٬دریافتند که حدود ۱/۳٢% از بیماران مورد مطالعه٬بعد از ٢سال از انجام این جراحی٬تحلیل استخوانی به میزان ≥mm۴ را در دیستال مولر دوم مجاور نشان می دهند.آنها همچنین متغیر سن را در میزان بروز این نواقص مورد بررسی قرار دادند.در مطالعه آنها تقریبا ۵۰%از افرادبا حدود سنی زیر ٢۵ سال که تحلیل استخوان ≥mm۴ داشتند٬پس از دو سال کاملا بهبود یافتند درحالیکه تنها درصد کمی از افراد بالای ٢۶ سال٬پس از این مدت٬بهبودی مطلوبی نشان دادند.)٢۳ و ٢۴(نتایج مشابهی نیز توسط آقایانAdeyemo(۴٢) ونیز Marmary(۴۸)بدست آمد.آنها دریافتند که بیشتر شکست ها در زمینه ی پروسه بهبود استخوان٬بعد از حذف مولر سوم مندیبل٬در افراد ۵۰-۳۰ سال و به میزان ۲۱% است٬حال آنکه این اتفاق تنها در ۳% از افراد در حدود سنی ۲۹-۲۰سال٬رخ می دهد.اینجاست که فاکتور سن مورد اهمیت و بررسی واقع می شود.
پریودنتیت٬یک بیماری مرتبط با سن است ولی وابسته به سن نمی باشد.(۳)اهمیت سن توسط Kugelberg مورد تأکید قرار گرفته بود.(٢۳ و ٢۴)از تجربه کلینیکی حاصل این گونه می توان استنباط کرد که٬جراحی حذف مولر سوم٬اگر در سنین پایین تر صورت گیرد٬نواقص بافت های پریودنتال٬کمتر وروند بهبودی٬سریعتر خواهد بود.
پریودنتیت مزمن به علت پیشرفت آرام٬معمولا در اواسط دهه ی مربوط به سنین ۳۰سالگی ویا دیرتر٬به طور کلینیکی آشکار می شود.(۲)
مانیز در این مطالعه گروه سنی ۴۰-٢۰سال را درنظر گرفتیم که تقریبا در محدوده ی گروهی که مشکلات ترمیم استخوان کمتری داشتند٬قرار می گیرند.
در بروز یا عدم رخداد عوارض هرنوع جراحی٬داشتن مهارت وتجربه ی کافی٬قطعا موثر خواهد بود.این گونه است که نقش جراح در ایجاد مشکلات حین و بعداز عمل٬مهم جلوه می کند.
آقای Sisk AL هم در سال ۱۹۸۶در این رابطه مطالعه ای داشتند که به بررسی مشکلات پریودنتال بعد از حذف مولر سوم نهفته توسط دو جراح با درجه ی مهارت متفاوت٬در بین ۲۰۸بیمار پرداختند.
در تحقیق آنهادو گروه مطالعه٬با شرایط و متغیرهای یکسان٬وجود داشتند که یک گروه توسط جراحی با تجربه٬مورد جراحی قرار می گرفتند و گروه دیگر٬توسط یک رزیدنت کم تجربه.نتایجی که برای هردو گروه به دست آمد٬بدین صورت بود که٬حدود ۱/۶% مشکلات شامل استئوئیت٬خونریزی حین وبعداز عمل٬صدمه به عصب دندان مذکور و شکست ترمیم آمالگام یا کراون دندان مجاور٬مربوط به فک بالای گروه جراحی شده توسط رزیدنت بود که این نتایج برای فک بالای گروه کنترل٬ ۳/۱% بود.(۴۱)این یافته ها نشانگر کاهش عوارض ایجاد شده٬بعد از عمل٬برای گروه کنترل بود.
در این مطالعه٬برداشت پیوند استخوان توسط متخصص جراحی فک و صورت انجام شده و کل پروسه به طور میانگین حدود ۵ دقیقه طول کشید.

موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت
 [ 10:54:00 ب.ظ ]




علم چون گذشته،محصول جرقه های ناگهانی بلوغ و اندیشه ی یک یا چند دانشمند معدود نیست،بلکه کوششی آگاهانه،منظم و در عین حال نهادی و سازمان یافته است تا به حل یک مسأله یا دشواری ذهنی و یا عملی نایل آید.چنین خصلتی،علم را با دیگر نهادها و ارزش های اجتماعی پیوندی مستحکم می زند به همین دلیل امروزه در بیشتر کشورها،سازمان هایی ویژه به کار علم مشغولند.بی تردید توسعه کمی و کیفی جوامع،همگی مرهون تصمیم سازی ها و تصمیم گیری هایی است که بر پایه تحقیقات علمی صورت گرفته است.از این رو مدت ها این نظر و تلقی حاکم بوده است که نوآوری های تکنولوژیک از درون خود پیشرفت های علمی(و یا گاه از تحقیقات پایه ای کنجکاوانه)نشأت می گیرند،به عبارت دیگر روند و جهت پیشرفت علوم و تحقیقات تا حدود زیادی تابع عوامل درونی است.
در همین راستا از تحقیق تعاریفی مطرح شده است که به چند نمونه از آن ها اشاره می کنیم :
تحقیق را می توان تجزیه و تحلیل،ثبت عینی و نظام مند مشاهدات کنترل شده که به پروراندن قوانین کلی،اصول،نظریه ها و همچنین به پیش بینی و یا احتمالاً به کنترل نهایی رویدادها منجر می شود تعریف کرد. تحقیق عبارت است از بررسی نظام یافته،کنترل شده،تجربی و انتقادی در مورد پدیده ها است که روابط احتمالی بین این پدیده ها به وسیله نظریه و فرضیات هدایت می شوند. تحقیق عبارت است از مجموعه فعالیت های منطقی،منظم،منسجم و هدفمند که در پی دستیابی به یک یا ترکیبی از خواسته های زیر به صورت فردی یا گروهی صورت می گیرد : ۱)ارضای یک حس کنجکاوی معرفتی (تحقیق بنیادی )
۲) توصیف،یک شرایط یا نگرش عده ای از افراد(تحقیق پیمایشی،همبستگی و ……)
۳)جستجوی پاسخ و راه حل برای یک مسأله و مشکل واقعی (تحقیق کاربردی و …..) (خاکی،۱۳۸۷: ۸۸ ـ ۸۶ ).
(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت nefo.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

بنابراین سعی بر آن است در این فصل جامعه آماری تحقیق،داده های تحقیق،روش تحقیق، همچنین ابزار جمع آوری و تحلیل داده ها و روایی و پایایی پرسشنامه تعریف شود.
۳-۲- روش تحقیق
روش تحقیق به مجموعه ای از گام ها و مرحله هایی اشاره دارد که پژوهشگر برای رسیدن به پاسخ و راه حل باید یکی پس از دیگری آن ها رابردارد تا به پاسخ یا راه حل دست یابد. روش به معنای رفتن در راه است.چنین معنایی ضروری می سازد برای رسیدن به مقصد که همانا یافتن پاسخ یا راه حل برای پرسش و مسأله است گام هایی را برداشت.این گام ها باید استوار، منطقی و نظام مند یکی پس از دیگری به سوی هدف بر داشته شوند(خاکی،۱۳۹۱: ۱۹۲ ـ۱۹۱).
منظور از روش تحقیق این است که مشخص شود چه نوع روشی برای بررسی موضوع لازم است،که این امر بستگی به اهداف و ماهیت پژوهش و امکانات اجرای آن دارد.بر اساس هدف،تحقیقات علمی را به سه گروه بنیادی(پایه ای)،کاربردی و عملی تقسیم می کنند.که در این تحقیق روش پژوهش کاربردی است.تحقیقات کاربردی با بهره گرفتن از زمینه و بستر شناختی و معلوماتی که از طریق تحقیقات بنیادی فراهم شده برای رفع نیازمندی های بشر و بهبود و بهینه سازی ابزارها،روش ها،اشیاء و الگوها در جهت توسعه ی رفاه و آسایش و ارتقای سطح زندگی انسان مورد استفاده قرار می گیرند(حافظ نیا،۱۳۸۶: ۵۱).
روش شناسی این پژوهش از نظر هدف کاربردی و بر حسب نوع داده ها توصیفی و از نوع پیمایشی _ همبستگی است که در آن به تشریح ارتباط بین متغیرهای موجود با بهره گرفتن از روش تحلیل عاملی تأییدی می پردازیم.
۳-۳- مراحل انجام تحقیق
در پژوهش حاضر پس از تهیه طرح تحقیق و مطالعه و جمع آوری مبانی نظری آن،الگوی مفهومی طراحی گردید،در ادامه پس از توزیع و جمع آوری پرسشنامه ها براساس تجزیه و تحلیل داده های حاصل از آن ها نتیجه گیری و پیشنهادات ارائه می گردد.
۳-۴- منابع و ابزار گردآوری داده ها و اطلاعات
روش های گرد آوری اطلاعات را به طور کلی به دو طبقه می توان تقسیم کرد : الف) روش کتابخانه ای : در این پژوهش برای جمع آوری اطلاعات مربوط به پیشینه تحقیق و ادبیات موضوع از کتاب ها و مقالات تخصصی و پایان نامه ها و جستجو در پایگاه های اینترنتی استفاده شده است.
ب) روش میدانی : روش های میدانی به روش هایی اطلاق می شود که محقق برای گردآوری اطلاعات ناگزیر است به محیط بیرون برود و با مراجعه به افراد یا محیط،و نیز برقراری ارتباط مستقیم با واحد تحلیل یعنی افراد،اعم از انسان،مؤسسات،سکونتگاه ها،موردها و غیره اطلاعات مورد نظر خود را گردآوری کند(حافظ نیا،۱۳۸۶ :۱۷۹).
بنابراین به منظور گردآوری داده های مورد نیاز در ارزیابی عملکرد عوامل مؤثر بر زنجیره تأمین در شرکت مانیزان از روش میدانی استفاده شده است.ابزار سنجش وسایلی هستند که محقق به کمک آن ها قادر است اطلاعات مورد نیاز خود را گردآوری،ثبت و کمی نماید.انواع ابزارگردآوری اطلاعات عبارت اند از : پرسشنامه،مصاحبه،مشاهده،آزمون و تصویربرداری.لذا در این پژوهش صرفاً از پرسشنامه برای جمع آوری اطلاعات استفاده شده است.علاوه براین به منظور سنجش متغیرهای تحقیق از مقیاس ترتیبی در قالب طیف پنج تایی لیکرت استفاده شده است. همچنین پرسشنامه از دو بخش عمومی و تخصصی تشکیل شده است که بخش عمومی دارای ۵ سؤال است که این سؤال ها در مورد ویژگی های جمعیت شناختی پاسخ دهندگان می باشد. بنابراین سؤالات بخش عمومی در زمینه سن،جنسیت،میزان سابقه کار،سمت و میزان تحصیلات پاسخ دهندگان است که به صورت بسته می باشد.علاوه بر این بخش تخصصی پرسشنامه از ۳۰ سؤال تشکیل گردیده که برای بررسی نظرات پرسنل شرکت مانیزان می باشد که در آن سوالات در یک مقیاس پنج تایی(از ۱ به معنای خیلی کم تا ۵ به معنای خیلی زیاد)در خصوص عملکرد عوامل مورد بررسی قرار گرفته است.که از سؤال ۱تا ۴ مربوط به فرضیه اول، سؤال ۵تا ۹ فرضیه دوم،سؤال ۱۰ تا ۱۴ فرضیه سوم،سؤال۱۵ تا ۱۸ فرضیه چهارم،سؤال ۱۹ تا ۲۲ فرضیه پنجم، سؤال۲۳ تا ۲۶ فرضیه ششم و سؤال۲۷ تا ۳۰ مربوط به فرضیه هفتم می باشد.
۳-۵- جامعه آماری
جامعه آماری این پژوهش شرکت فرآورده های لبنی مانیزان می باشد که تعداد افرادی که در این شرکت در حال فعالیت هستند،اعم از کارکنان شرکت،شاغلان در ایستگاه های جمع آوری و توزیع کنندگان می باشند و تعداد آن ها ۵۰۳ نفر می باشند.
۳-۶- روش نمونه گیری و تعیین حجم نمونه
روش نمونه گیری مورد استفاده در این پژوهش،نمونه گیری تصادفی طبقه ای است.که با توجه به جدول مورگان تعداد ۲۱۷ نفر را به عنوان نمونه انتخاب شده اند. و با در نظر گرفتن فاکتورهای زیر حجم نمونه با بهره گرفتن از فرمول کوکران که یکی از پرکاربردترین روش ها برای محاسبه حجم نمونه آماری است به صورت زیر محاسبه می گردد .

که در فرمول فوق:
N :حجم جامعه آماری
n: حجم نمونه
Z: مقدار متغیر نرمال واحد استاندارد ، در سطح اطمینان ۹۵ درصد برابر ۹۶/۱ می باشد. p: مقدار نسبت صفت موجود در جامعه است ، اگر در اختیار نباشد می توان مقدار آن را ۵/۰ در نظر گرفت. در این حالت مقدار واریانس به حداکثر میزان خود می رسد. q: در صد افرادی که فاقد صفت در جامعه هستند.(q = 1 – p) d : مقدار اشتباه
۳-۷- روش تجزیه و تحلیل داده ها
پس از آنکه محقق داده ها را گردآوری،استخراج و طبقه بندی نمود و جداول توزیع فراوانی و نسبت های توزیع را تهیه کرد،باید مرحله ی جدیدی از فرایند تحقیق که به مرحله تجزیه و تحلیل داده ها معروف است آغاز شود.این مرحله در تحقیق اهمیت زیادی دارد؛زیرا نشان دهنده ی تلاش ها و زحمات فراوان در گذشته است.در این مرحله محقق با بهره گرفتن از روش های مختلف و با تکیه بر معیار عقل سعی می کند اطلاعات و داده ها را در جهت آزمون فرضیه و ارزیابی آن مورد بررسی قرار دهد.در مرحله تجزیه و تحلیل آنچه مهم است این است که محقق باید اطلاعات و داده ها را درمسیر هدف تحقیق،پاسخگویی به سؤال و سؤالات تحقیق و نیز ارزیابی فرضیه های خود جهت داده،مورد تجزیه و تحلیل قرار دهد( حافظ نیا، ۱۳۸۶ :۲۳۱).
تجزیه و تحلیل داده ها،فرآیندی چند مرحله ای است که در آن داده هایی که با بکار گیری شیوه ها و ابزارهای گردآوری در نمونه(جامعه)آماری فراهم آمده اند خلاصه،کدبندی و دسته بندی و در نهایت پردازش می شوند،تا امکان انواع تحلیل ها و برقراری ارتباط ها بین این داده ها به منظور آزمون فرضیه ها فراهم آید.در این فرایند،داده ها هم از لحاظ نظری و هم از جنبه تجربی پالایش می شوند و با تکنیک های گوناگون آماری،از آن ها اطلاعات استنتاج و تعمیم داده می شوند(خاکی،۱۳۹۱ :۲۴۱ ـ ۲۴۰).
بنابراین در این پژوهش با بهره گرفتن از آمار توصیفی به بررسی ویژگی جامعه آماری و سپس به آزمون فرضیات و ترسیم دیاگرام تحلیل مسیر می پردازیم.به منظور تعیین رابطه بین متغیرهای مستقل و وابسته و بررسی فرضیه های تحقیق با بهره گرفتن از نرم افزار SPSS،از آزمون تحلیل عاملی تأییدی استفاده می شود.و به منظور روابط علت و معلولی بین متغیرها و مؤلفه های مورد بررسی با بهره گرفتن از نرم افزار معادلات ساختاری آموس روابط بین متغیرها مدل سازی می گردد.
۳-۸- الف ) مدل معادلات ساختاری
برای بررسی روابط علی بین متغیرها به صورت منسجم کوشش های زیادی در دهه های اخیر صورت گرفته است یکی از روش های نوید بخش در این زمینه مدل معادلات ساختاری یا تحلیل چند متغیری یا متغیرهای مکنون است.مدل معادلات ساختاری یک رویکرد آماری جامعی برای آزمون فرضیه هایی درباره روابط بین متغیرهای مشاهده شده و متغیرهای مکنون می باشد. لذا از طریق این رویکرد می توانیم قابل بودن مدل های نظری را در جامعه های خاص با بهره گرفتن از داده ها ی همبستگی،غیر آزمایشی،آزمایشی آزمون نمود(حسینی،۱۳۹۲ :۸۳). یک مدل معادلات ساختاری کامل از دو مؤلفه تشکیل شده است الف) یک مدل ساختاری که ساختار علی خاصی رابین متغیرهای مکنون مفروض می دارد.ب) یک مدل اندازه گیری که رابطه هایی را بین متغیرهای مکنون و متغیرهای نشانگر(اندازه گیری شده) تعریف می کند.هنگامی که داده های به دست آمده از نمونه مورد بررسی به صورت ماتریس همستگی درآمد باید برازش آن را برای جامعه ای که نمونه از آن استخراج شده فراهم آورد.متغیرهای مکنون در مدل معادلات ساختاری به دو دسته برونزا و درون زا تقسیم می شوند.متغیر های برون زا متغیرهایی است که علت تغییرات آن ها در مدل منظور نشده و خارج از مدل است.متغیرهای درونزا متغیرهایی است که تغییرات آن ها توسط متغیرهای موجود در مدل پیش بینی شده است(خاکی،۱۳۹۱ :۲۶۵).
۳-۹- تحلیل عاملی
تحلیل عاملی یکی از فنونی است که اسپیرمن[۲۱] مطرح کرد و در تحقیق چند متغیره به طور بسیار گسترده ای استفاده می شود.تحلیل عاملی،مبنایی تجربی برای کاهش همه ی این متغیرها به چند عامل،از طریق ترکیب متغیرهایی که در حد متوسط یا زیاد با یکدیگر همبستگی دارند عرضه می کند.هر مجموعه از متغیرهایی که ترکیب شده اند یک عامل را تشکیل می دهند که بیانی ریاضی برای عنصر مشترک متغیرهایی است که ترکیب شده اند (خاکی،۱۳۹۱ :۲۶۵).
۳-۱۰- معیارهای برازش
تعریف معیارهای NFI،IFI،CFI،RMR،GFI،RMSEA در نرم افزار آموس
NFI(شاخص نرم شده برازندگی) : این شاخص به مقایسه مدل مستقل(مدلی که در آن بین متغیرها هیچ رابطه ای نیست)با مدل پیشنهادی مورد نظر می پردازد.این شاخص هر چه به عدد یک نزدیک تر باشد به این معناست که مدل پیشنهادی ما مناسب بوده است و به صورت زیر محاسبه می شود :

به طوریکه A : مقدار آماره خی دو تحت مدل مستقل و B : مقدار آماره خی دو تحت مدل پیشنهادی هستند.
IFI (شاخص برازندگی فزاینده): این معیار شاخص برازش نموی است و به صورت زیر محاسبه می شود:

به طوریکه A : مقدار آماره خی دو تحت مدل مستقل و B : مقدار آماره خی دو تحت مدل پیشنهادی است و d : نشان دهنده درجه آزادی مدل پیشنهادی است.هرچه IFI به یک نزدیک تر باشد نتیجه می گیریم که مدل پیشنهادی مناسب تر است.
CFI (شاخص برازندگی تطبیقی یا مقایسه ای): این معیار به صورت زیر محاسبه می شود:

در این فرمول نیز A و B همانند قبل تعریف می شوند وdb و d به ترتیب نشان دهنده درجه آزادی مدل مستقل و مدل پیشنهادی هستند.هرچه مقدار CFI به یک نزدیک تر باشد نتیجه می گیریم که مدل پیشنهادی مناسب تر است.
RMR (میانگین مجذور پس مانده ها): این شاخص نشان دهنده ریشه میانگین مربعات باقی مانده هاست که در آن i نشان دهنده سطر،j ستون،k طبقه می باشند. هر چه مقدار RMR به صفر نزدیک تر باشد مدل مناسب تر است . فرمول RMR به صورت زیر می باشد :

در فرمول فوق و به ترتیب نشان دهنده کوواریانس و واریانس مشاهدات هستند نشان دهنده درجه آزادی مدل مستقل است.هرچه RMR به صفر نزدیک تر باشد مدل مناسب تر است.
GFI: شاخص نیکویی برازش است که دارای فرمول زیر است:

موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت
 [ 10:54:00 ب.ظ ]




محاسبه سه فاکتور بالا در جدول زیر نشان داده شده است ، ضمنا در سطر آخر میانگین همه آنها قرار گرفته است.نرخ TP بالاتر و Precision بالاتر و FP پایین تر نشان دهنده مدل پیش بینی بهتری است[۱۸].
جدول ۳- محاسبه نرخ مثبت صحیح،نرخ مثبت غلط و دقت
۴-۴- شروع مراحل انجام پروژه
۴-۴-۱-انتخاب کارخانه ها و تجهیزات مورد نظر برای پروژه

( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

حال با توجه به نکات عنوان شده راجع به انتخاب واحد مورد نظر و تجهیزات و پارامترهای موثر به چگونگی انتخاب دو کارخانه در شرکت بهره برداری نفت و گاز گچساران پرداخته می شود.برای این منظور یک بازه زمانی ۵ ماهه از ابتدای اردیبهشت سال ۱۳۹۲ تا انتهای شهریور همان سال در نظر گرفته شد.
در انتخاب کارخانه ها و واحدهای مورد نظر علاوه بر بررسی اطلاعات موجود و مرتبط راجع به رخداد خرابی در نرم افزار CMMS با افراد خبره و متخصص در این زمینه مشورت شد.از بین حدود ۳۰ کارخانه مختلف و همچنین بازدید از حدود ۱۰ کارخانه مختلف از نظر نوع کارکرد و همچنین با توجه به دوری مسافت دو کارخانه انتخاب شد.اطلاعات موجود در نرم افزار CMMS شامل موارد دقیق و کاملی از جمله تعداد خرابی در مدت زمان مورد نظر،علل و چگونگی رخداد خرابی ، مدت زمان توقف و کارکرد ردیف ها و خطوط کارخانه و چگونگی برطرف کردن ایراد و راه اندازی دوباره تجهیزات می باشد.با بررسی این اطلاعات و کمک گرفتن از افراد متخصص در زمینه های مکانیک ، برق و ابزار دقیق و با توجه به فصل گرما و فشار وارده به تجهیزات در کارخانه ها در نهایت دو کارخانه انتخاب شد.البته معیار قدیمی بودن این دو کارخانه و تجهیزات آنها نیز فاکتوری بود که باعث می شد احتمال وقوع خرابی در آنها را بیشترنماید.
بعد از انتخاب کارخانه های مورد نظر نوبت به انتخاب تجهیزات بحرانی و اساسی در آنها رسیده است.در هر کارخانه هزاران تجهیز ریز و درشت و ساده و مرکب وجود دارد که هر کدام به نوبه خود تاثیر خاصی روی روند کار کارخانه بجا می گذارند.این تجهیزات از خط ورودی کارخانه شروع می شوند و تا آخرین مکان خط خروجی ادامه دارند.در هر دو کارخانه تجهیزاتی مانند پمپ،کمپرسور هوا،الکتروموتور،فن های خنک کننده،موتور کمپرسور ، دیزل برق ، تلمبه های متفاوت ، کلید های مختلف الکتروکمپرسور،توربین و تجهیزات متفاوت دیگری وجود دارد.که باید از بین این همه تجهیز مهم یکی را برای ادامه پروژه انتخاب نمود.با بررسی های انجام شده و کمک از متخصصین امر توربین که شاید بتوان گفت اساسی ترین و مهم ترین تجهیز هر کارخانه بود انتخاب شد.در هر کارخانه ۳ یا ۴ ردیف قرار دارد که روی هر ردیف یک توربین عظیم تعبیه شده است.یک ردیف توربین خود تجهیز مرکبی است که شامل چهار تجهیز بزرگ توربین ، پاور توربین ، گیربکس و کمپرسور می باشد.توربین های انتخاب شده از دو نوع متفاوت به نام های رولزرویز و سولار می باشند.برای هر توربین حدود ۸۰ پارامتر مختلف در هر ساعت اندازه گیری و ثبت می شود.
اندازه گیری و ثبت برخی از این پارامترها با بهره گرفتن از داشبوردها و نشان دهنده های دیجیتالی و مکانیکی موجود در اتاق کنترل است و برخی دیگر توسط اپراتورها و با حضور در محیط فیزیکی کارخانه و مشاهده لحظه ای نشانگرهای مختلف تجهیزات انجام می شود.این پارامترها شامل دور، فشار ، حرارت ، لرزش ، سطح روغن ، جریان ، ولتاژ و آمپر می باشند.
۴-۴-۲-شناخت داده
این بخش به درک بیشتر و نزدیکی بهتر به داده کمک می کند و شامل توصیف و اکتشاف داده می باشد.همانطور که قبلا ذکر شد دو نوع داده مورد استفاده قرار گرفته است، یکی داده مربوط به شرایط تجهیزات که شامل وضعیت و سلامت آنها می باشد و دیگری داده مربوط به خرابی و نوع عملیات انجام شده در هنگام وقوع خرابی می باشد.
داده وضعیت
تا زمانی که تجیزات مشغول به کار وفعالیت هستند داده های مربوط به پارامترهای وضعیت که بطور مستقیم و غیر مستقیم روی کارکرد تجهیز اثر دارند ثبت می شوند.داده ها درون پایگاه داده ثبت می شوند تا برای استفاده در آینده مورد بررسی قرار گیرند.
برای این پروژه دو نوع توربین متفاوت در دو کارخانه نفتی با شرایط و منطقه جغرافیای مختلف مورد بررسی قرار گرفته است.
در نتیجه دو مجموعه داده برای این دو توربین استخراج شده است. مجموعه داده های متعلق به این دو نوع توربین مختلف در دو کارخانه نفتی متفاوت هستند که داده های آنها مربوط به مدت زمان بهار و تابستان سال ۱۳۹۲ می باشد.
برای هر نوع توربین در هر یک ساعت از شبانه روز حدود ۶۰ تا ۸۰ پارامتر مختلف ثبت و نگهداری می شود.که هر مجموعه داده در ۵ ماه از بهار و تابستان حدود ۳۵۰۰ رکورد خواهد داشت.برای هر توربین داده های مربوط به منطقه ، بخش ، کارخانه و ردیف مورد نظر نیز ثبت شده است.
داده رخداد خرابی
داده های خرابی زمان ، نوع عملیات و علت خرابی مربوط به هر توربین و یا تجهیز را مشخص می کند.همچنین نوع و مقدار کالای مصرفی برای رفع خرابی در صورت نیاز و مدت زمان توقف به علت خرابی نیز مشخص خواهد بود.این مجموعه داده از ۶ ماه اول سال ۱۳۹۲ در اختیار قرار گرفت و با بررسی دقیق همه رخدادهای خرابی از بین همه ماه ها خرابی های اساسی و بحرانی استخراج شد تا در ادامه پروژه مورد استفاده قرار بگیرد.
در بخش شناخت داده مجموعه داده ها با حدود ۷۰۰۰ رکورد و همچنین رکوردهای خرابی در طول ۵ ماه بررسی این پروژه شناسایی و برای آنالیز و تحلیل آماده شدند.
۴-۴-۳-آماده سازی و آنالیز داده
بدست آوردن داده با کیفیت و مناسب اولین گام اساسی در طراحی یک مدل پشتیبان تصمیم قوی است.مهم نسیت داده ها چگونه بدست آمده اند بلکه مهم این است که داده صحیح،با دقت و با کیفیت باشد.داده های بدست آمده به دو دسته تقسیم می شوند تا بتوان از یک دسته به عنوان مجموعه داده آموزشی و از دسته دیگر به عنوان مجموعه داده آزمایشی استفاده نمود.
انتخاب پارامترها
همان طور که در بخشهای قبل ذکر شد برای هر توربین حدود ۷۰ تا ۸۰ پارامتر مختلف ثبت می شود که با مشورت با افراد متخصص در این زمینه و بررسی علل توقف و خرابی توربین ها ، برای توربین موجود در کارخانه فشارقوی ۳۵ پارامتر اساسی و برای توربین موجود در کارخانه بی بی حکیمه ۲ تعداد ۳۴ پارامتر اساسی انتخاب و برای ادامه کار مورد بررسی قرار گرفتند.جدول پارامترهای انتخاب شده در ادامه قابل مشاهده می باشد.
جدول ۴- نام پارامترهای کارخانه فشارقوی

نام پارامتر
ردیف
نام پارامتر
ردیف

لرزش یاتاقانهای توربین نیرو- عقب

۱۸

سرعت توربین R.P.M

۱

لرزش یاتاقانهای توربین نیرو- ضربه گیر

۱۹

سرعت توربین نیرو R.P.M

۲

لرزش یاتاقانهای جعبه دنده سرعت کم افقی

۲۰

حرارت E.G.T

۳

موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت
 [ 10:54:00 ب.ظ ]




شاخص­ های ثانویه خون­شناسی برای توصیف اندازه سلول­ها و میزان هموگلوبین آن­ها به­کار می­رود [۴].

( اینجا فقط تکه ای از متن پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

الف- حجم متوسط گویچه قرمز (MCV)
این شاخص حجم متوسط هر یاخته قرمز خون را نشان می­دهد. این شاخص بر حسب فمتولیتر محاسبه می­ شود. هر فمتولیتر برابر یک میکرومتر مکعب است.
(۳-۶)
در این رابطه، HCT میزان هماتوکریت و RBC تعداد یاخته­های قرمز خون (بر حسب میلیون در میلی­متر مکعب) را نشان می­دهد [۴].
ب- میانگین غلظت هموگلوبین ذره­ای (MCHC)
این شاخص غلظت هموگلوبین در توده یاخته­های قرمز را بر حسب درصد نشان می­دهد.
(۳-۷)
در این رابطه، Hb میزان هموگلوبین (بر حسب گرم در دسی­لیتر) و HCT میزان هماتوکریت را نشان می­دهد [۴].
ج– میانگین هموگلوبین ذره­ای (MCH)
این شاخص متوسط هموگلوبین در یک یاخته قرمزخون را بر حسب پیکوگرم نشان می­دهد.
(۸-۳)
در این رابطه، Hb میزان هموگلوبین (بر حسب گرم در دسی­لیتر) و RBC(بر حسب میلیون در میلی­متر مکعب) را نشان می­دهد [۴].
۳-۵- تعیین سن
برای تعیین سن از روش‌ آناتومیکی (فلس) استفاده شد. اساس کار در این روش تغییرات دوره‌ای است که در رشد سالانه ماهی روی می‌دهد.در این بررسی سن ماهیان با بهره گرفتن از بررسی دوایر سنی موجود روی فلس های برداشت شده از ناحیه بین خط جانبی و جلو باله پشتی انجام شد. رشد فلس متناسب با رشد ماهی است. همزمان با رشد فلس، حلقه­های رشد سالیانه در حاشیه فلس تشکیل می شود. حلقه های رشد، یک الگوی متحدالمرکز است که مرتبط با شرایط محیطی و رشد در طی یک سال تشکیل می شود. به کمک این حلقه ها می توان سن ماهی را تعیین کرد [۸۸]. برای زایل نمودن مواد لزج موکوسی روی فلس، شستشوی آن با آب گرم و محلول های تمیز کننده مانند مایع ظرفشویی و سپس آب مقطر انجام شد. فلس‌های آماده شده به کمک میکروسکوپ مطالعه گردید.
۳-۶- محاسبه شاخص توسعه گنادی (GSI)
پس از تعیین جنسیت، گنادها به طور کامل خارج و برای محاسبه GSI با دقت ۰۱/۰ گرم وزن گردید. این شاخص به صورت زیر محاسبه می گردد [۱۷]:
(۳-۹)
در این رابطه برابر با وزن گناد و برابر با وزن بدن ماهی است.
۳-۷- تهیه بافت گناد
در این مطالعه، بخش میانی گناد تعداد ۵ قطعه ماهی ماده و ۵ قطعه ماهی نر از هر ایستگاه به­ طور تصادفی انتخاب و به منظور انجام مطالعات بافت شناسی در فرمالین ۱۰% قرار داده شد. سپس نمونه ها از مراحل آبگیری از طریق الکل­ با درجات مختلف، شفاف سازی با بهره گرفتن از گزیلول، پارافینه کردن، قالب‌گیری، برش و رنگ‌آمیزی به روش استاندارد هماتوکسیلین-ائوزین عبورداده شد. پس از رنگ­آمیزی با بهره گرفتن از میکروسکوپ نوری مرحله توسعه گنادی در جنس نر و ماده مورد شناسایی قرار گرفت [۷۱].
۳-۸- آماده ­سازی نمونه­ها جهت مطالعات مولکولی و اندازه ­گیری بیان ژن ویتلوژنین
بررسی های مولکولی شامل توالی­یابی ژن کدکننده ویتلوژنین و بررسی بیان آن، در طی دوره فرصت مطالعاتی تحت نظر پروفسور گنزالو مارتینز-ردریگز[۷۱] در مرکز علوم دریایی اندلوسیا[۷۲]، کادیز[۷۳]، اسپانیا اجرا گردید. در تمام پروتوکل­ها شامل کیت­های تجاری مورد استفاده، دستورالعمل شرکت سازنده دنبال شد. تمام آغازگرها از شرکت اینتگریتد DNA تکنولوژیز[۷۴] (کشور بلژیک) خریداری شد. توالی­یابی­ها با روش Dideoxy و توسط شرکت بیوتکنولوژی کمپانی (بیواری)[۷۵] انجام گردید.
۳-۸-۱- نمونه­برداری و تیمار
در این مطالعه حدود ۳۰ میلی­گرم از کبد تعداد ۵ قطعه ماهی ماده و ۵ قطعه ماهی نر از هر ایستگاه به منظور انجام مطالعات مولکولی در تیوب­های ۵ میلی­لیتری حاوی محلول محافظت­کننده از RNA[76] (ساخت شرکت فیت بیوتکنولوژی[۷۷]) قرار داده شد و برای استخراج RNA کل در دمای C°۲۰- قرار گرفت.
از آنجایی­که برای اندازه ­گیری میزان بیان هر ژن داشتن آغازگرهای اختصاصی در همان گونه الزامی است و توالی ژن ویتلوژنین و بتااکتین عروس­ماهی زاینده­رود تاکنون در بانک جهانی ژن به ثبت نرسیده است، لازم بود توالی­یابی و همسانه­سازی[۷۸] این دو ژن برای اولین بار در این گونه صورت پذیرد. از سوی دیگر با وجود ثبات نسبی ژن ویتلوژنین در بین ماهیان، به دلیل وجود ایزوفرم­های متعدد این ژن، به منظور جلوگیری از خطا در زمان اندازه ­گیری بیان ژن و ایجاد محصولات جانبی در واکنش­های زنجیره­ای پلیمراز (PCR)[79]، توالی­یابی کامل این دو ژن انجام گردید و سپس آغازگرهای مناسب برای انجام Real-time PCR از روی آن­ طراحی شد.
با توجه به این­که نمونه­برداری در زمان مورد انتظار برای بالا بودن بیان ژن ویتلوژنین صورت نگرفته بود، گروهی از ماهیان پس از صید به مدت ۲۴ ساعت تحت تیمار ۲۰۰۰ نانوگرم ۱۷بتا-استرادیول/ لیتر قرار گرفتند تا بیان این ژن به میزان کافی برای ساخت cDNA اختصاصی افزایش یابد [۲۹]. کبد آن­ها به تفکیک جنسیت در تیوب­های حاوی محلول محافظت­کننده از RNA و تا زمان استخراج RNA در دمای C°۲۰- قرار گرفت.
۳-۸-۲- استخراج و تعیین کمیت و کیفیت RNA
در تمام نمونه­ها، RNA با بهره گرفتن از کیت نوکلئواسپین RNA II[80] ساخت شرکت مچری-ناجل[۸۱] استخراج شد و هضم DNA بر روی ستون و با بهره گرفتن از آنزیم DNase فاقدRNase موجود در کیت انجام گرفت.
کمیت RNA به روش اسپکتروفتومتری در طول موج ۲۵۰ نانومتر توسط دستگاه بیوفتومترپلاس[۸۲] ساخت شرکت اپندورف[۸۳] مورد بررسی قرار گرفت. به علاوه کیفیت تقریبی آن از طریق دو شاخص که از رابطه میزان جذب نوری در ۲۶۰ نانومتر/ ۲۸۰ نانومتر و همچنین ۲۶۰ نانومتر/ ۲۳۰ نانومتر به­دست می ­آید و مستقیما توسط دستگاه محاسبه می­ شود، مورد ارزیابی قرار گرفت. حداکثر جذب نوری توسط RNA در ۲۶۰ نانومتر صورت می­گیرد. درحالی­که پروتئین دارای حداکثر جذب نوری در ۲۸۰ نانومتر است. بنابراین نسبت جذب نوری در ۲۶۰ نانومتر/ ۲۸۰ نانومتر شاخص مناسبی برای ارزیابی آلودگی­های پروتئینی است. چنانچه مقدار این شاخص در دامنه ۲-۸/۱ قرارگیرد، کیفیت RNA مناسب ارزیابی می­گردد. برای بررسی بیش­تر کیفیت RNA از نسبت جذب نوری ۲۶۰ نانومتر/ ۲۳۰ نانومتر استفاده می­ شود. اما بر خلاف شاخص نسبت میزان جذب نوری در ۲۶۰ نانومتر/۲۸۰ نانومتر که بیش­تر تحت تاثیر آلاینده­های پروتئینی و نوکلئوتیدی تغییر می­ کند، این شاخص تحت تاثیر تعداد بیش­تری از آلاینده­ها قرار دارد و در نتیجه از دقت کم­تری برخوردار است. چنانچه مقدار این شاخص در دامنه ۲-۷/۱ قرارگیرد، کیفیت RNA مناسب ارزیابی می­ شود [۷۶].
برای بررسی دقیق­تر کیفیت RNA از دستگاه بیوآنالیزور ۲۱۰۰[۸۴] و کیت RNA نانو ۶۰۰۰[۸۵] ساخت شرکت اجیلنت تکنولوژیز، لایف ساینسیز[۸۶] استفاده شد. این دستگاه با بهره گرفتن از شاخصی به نام RIN [۸۷] کیفیت RNA را نمایش می­دهد. این شاخص به منظور استانداردسازی فرایند تفسیر صحت RNA و حذف تفسیرهای شخصی از کیفیت RNA ابداع شده است که روش ازریابی به روش الکتروفورز نیز در آن مدنظر قرار می­گیرد. این روش چون بر مبنای تعیین چشمی نسبت ریبوزومی (که از تقسیم زیرواحدهای ۱۸S به ۲۸S به دست می ­آید) از روی ژل حاصل از الکتروفورز ایجاد می­ شود، معمولاً با خطا همراه است. در صورتی­که نرم­افزار الگوریتمی RIN، علاوه بر این­که این شاخص را به صورت خودکار تعیین می­ کند، یک سیستم نمره­دهی از ۱ تا ۱۰ ارائه می­دهد که در آن ۱۰ دارای بهترین و ۱ دارای بدترین کیفیت RNA است (شکل ۳-۶) [۷۳].
۳-۸-۳- سنتز cDNA
برای سنتز cDNA جهت توالی­یابی، RNA کل استخراج شده یک نمونه ماهی نر تیمار شده با ۱۷آلفا-استرادیول و همچنین یک نمونه ماهی ماده از ایستگاه چشمه­دیمه انتخاب شد. دلیل انتخاب جنس نر، حساسیت بالاتر این جنس به حضور استروژن­های محیطی و در نتیجه افزایش بیان ویتلوژنین در نتیجه تیمار است.
حدود ۵۰۰ نانوگرم از هریک از آن­ها با بهره گرفتن از کیت سنتز cDNA به نام کیواسکریپت[۸۸] ساخت شرکت کوانتا بیوساینسیز[۸۹] به­ صورت معکوس رونویسی شد. به­ طور خلاصه، واکنش با بهره گرفتن از کیو اسکریپت ری­اکشن میکس[۹۰] (۱X از غلظت نهایی) و کیواسکریپت ریورس ترنسکریپتاز[۹۱] (۵/۲X از غلظت نهایی) انجام گرفت. برنامه رونویسی معکوس شامل ۵ دقیقه در C°۲۲، ۳۰ دقیقه در C°۴۲ و ۵ دقیقه در C°۸۵ بود.
۳-۸-۴- همسانه­سازی cDNA نسبی ویتلوژنین در P. esfahani
آغازگرهای اختصاصی ژن ویتلوژنین از مناطق بسیار باثبات cDNA کامل سایر ماهیان استخوانی طراحی شد (جدول ۳-۲). PCR با بهره گرفتن از ۱ واحد بیوتک DNA پلیمراز[۹۲] (ساخت شرکت بیولاین[۹۳])، cDNA، بافر PCR شرکت سازنده (۱X از غلضت نهایی)، ۵/۰ میکرومولار از هر یک از آغازگرهای مستقیم و معکوس، ۲/۰ میلی مولار dNTPs و ۵/۱ میلی مولار MgCl2 در حجم نهایی ۲۰ میکرولیتر انجام شد. برنامه PCR شامل ۱۰ دقیقه واسرشته­سازی اولیه در C°۹۵، ۳۵ سیکل تکثیر (واسرشته­سازی به مدت ۳۰ ثانیه در C°۹۵، الحاق به مدت ۳۰ ثانیه در C°۴/۶۰ و بسط به مدت ۳۰ ثانیه در C°۷۲ ) و ۱۰ دقیقه بسط نهایی در C°۷۲ توسط دستگاه مسترسایکلر پرواس[۹۴] (ساخت شرکت اپندورف) بود.
محصول PCR در ژل آگارز ۱% با TBE 1X رنگ­آمیزی شده با جل رد[۹۵] (ساخت شرکت بیوتیوم[۹۶]) اجرا و توسط سیستم کمی­داک ایکس.آر.اس[۹۷] و به کمک نرم­افزار ایمیج لب[۹۸] (ساخت شرکت بیورد[۹۹]) قابل رویت شد. محصول PCR توسط کیت نوکلئواسپین جل اند PCR کلین-آپ[۱۰۰] ( ساخت شرکت مچری-ناجل) تصفیه و به منظور توالی­یابی با بهره گرفتن از کیت کلونینگ توپو-تی.آ[۱۰۱] (ساخت شرکت اینویتروژن لایف تکنولوژیز[۱۰۲]) به داخل وکتورpCR®۴TOPO® کلون شد. محصول این کیت برای انتقال به سلول­های Escherichia coli و سپس کشت در پلیت­های آگار LB آمپی­سیلین به مدت یک شب در C°۳۷ مورد استفاده قرار گرفت. پس از کشت ۶ کلون باکتریایی در ۳ میلی­لیتر از محیط کشت مایع LB آمپی­سیلین به مدت یک شب در شیکر C°۳۷، با بهره گرفتن از کیت نوکلئواسپین پلاسمید[۱۰۳] (ساخت شرکت مچری-ناجل) پلاسمید استخراج شد. در هر دو کلون، هر دو رشته­ توسط آغازگرهای مستقیم و معکوسM13 توالی­یابی شد.
۳-۸-۵- همسانه­سازی cDNA نسبی بتا-اکتین در P. esfahani
به منظور حصول توالی اولیه بتا-اکتین در عروس­ماهی زاینده­رود، از آغازگرهای مورد استفاده برای همسانه­سازی نسبی ژن بتا-اکتین در Rhamdia quelen (KC195970) استفاده شد (جدول ۳-۲) [۱۳]. کلیه مراحل PCR، تصفیه، همسانه­سازی و توالی­یابی مطابق با روش بند ۳-۸-۴ انجام گردید.
۳-۸-۶- بسط ویتلوژنین به سمت انتهای َ۳
از آنجایی که انتظار می­رفت فاصله قطعه کوتاه میانی cDNA ویتلوژنین در P. esfahani تا انتهای َ۳ آن بسیار طویل باشد، از استراتژی بسط این قطعه به سمت مناطقی از ژنوم که در بین بسیاری از کپورماهیان باثبات بود، استفاده شد. به این منظور، با بهره گرفتن از سه آغازگر Nested مستقیم که در انتهای َ۳ قطعه ویتلوژنین میانی موجود طراحی شد و ۳ آغازگر دژنره[۱۰۴] معکوس از مناطق باثبات سایر کپورماهیان به­ ویژه گونه ­هایی که در بلاست[۱۰۵] قبلی قطعه ویتلوژنین میانی شباهت بیش­تری را نشان داده بودند، چندین PCR انجام شد (جدول ۳-۲). تمام PCRها مطابق با برنامه بند ۳-۸-۴ انجام گرفت. تنها زمان بسط به ۲ دقیقه و ۳۰ ثانیه افزایش یافت. پس از هر سه Nested PCR، قطعات در ژل آگارز ۱% با TBE 1X اجرا شدند. باندهای دارای اندازه پیش ­بینی شده از داخل ژل بریده و با بهره گرفتن از کیت نوکلئواسپین جل اند PCR کلین-آپ تصفیه شدند. این قطعات با بهره گرفتن از کیت کلونینگ جت PCR[106] (ساخت شرکت فرمنتاس لایف ساینسیز[۱۰۷]) به داخل وکتور pJET1.2/blunt کلون شدند.
۳-۸-۷- تکثیر سریع دوانتهای cDNA (RACE)[108] در ویتلوژنین
به منظور همسانه­سازی انتهای َ۳ در ویتلوژنین، چندین مرحله PCR با ۴ آغازگر Nested مستقیم که در انتهای َ۳ قطعه طویل شده آن از مرحله قبل طراحی شده بود، در مقابل آغازگرهای معکوس خارجی و داخلی پروتوکل ۳’RACE کیت فرست چویش آر.ال.ام-ریس[۱۰۹] (ساخت شرکت امبیون، لایف تکنولوژیز[۱۱۰]) انجام شد. با بهره گرفتن از آداپتور ۳’RACE موجود در کیت، رونویسی معکوس RNA کل صورت گرفت. شرایط PCR مشابه بند ۳-۸-۴ بود.
برای کلون انتهای َ۵ از پروتوکل ۵’RACE کیت مذکور استفاده شد. در این پروتوکل به­ طور خلاصه cDNA با بهره گرفتن از ۱ میکروگرم RNA کل به همراه دسامرهای تصادفی موجود در کیت سنتز گردید. دو مرحله PCR با شرایط مشابه بند ۳-۸-۴ و با بهره گرفتن از ۲ آغازگر معکوس طراحی شده در انتهای َ۵ قطعه cDNA میانی به­دست آمده از مراحل قبلی، انجام گرفت (جدول ۳-۲). در این واکنش­ها، آغازگرهای خارجی و داخلی َ۵ موجود در کیت به عنوان آغازگر مستقیم استفاده شدند.
تمام محصولات حاصل از پروتوکل­های َ۳ و َ۵ در ژل آگارز ۱% اجرا شدند. باندهای دارای اندازه مورد انتظار جدا و تصفیه و به منظور توالی­یابی با بهره گرفتن از کیت کلونینگ توپو-تی.آ به داخل وکتورpCR®۴TOPO® کلون شدند.
در نهایت هر سه توالی cDNA بدست آمده (َ۳، میانی و َ۵) با توجه به ۱۰۰% شباهت در قسمت­ های دارای همپوشانی و با بهره گرفتن از یک ادغام کننده الگوریتمی (http://pro.genomics.purdue.edu/emboss/) به یکدیگر متصل شدند.
۳-۸-۸- تکثیر سریع دوانتهای cDNA در بتا-اکتین

موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت
 [ 10:54:00 ب.ظ ]
 
مداحی های محرم