معمولا” بعد از گذشت زمان معینی پس از افزودن سوبسترا ، فعالیت آنزیمی توسط مهارکننده های ویژه(اسید سولفوریک ،اسید کلریدریک واسید فسفریک و…) متوقف می گردد.این عمل هنگامی صورت می گیرد که میان شدت رنگ تولید شده و غلظت واکنشگر مورد نظر رابطه خطی برقرار شده باشد. سرعت واکنش نیز خود تحت کنترل غلظت آنزیم ،غلظت سوبسترا و کروموژن ،PH و دمای واکنش قرار دارد.

• • قرائت پلیت

در سیستم های الایزا نتیجه واکنش آنزیمی تولید محصولات رنگی است و با توجه به اینکه یکی از اهداف اصلی سیستم الایزا تعیین مقدار یک واکنشگرمعین است ، می توان نتیجه گرفت که شدت رنگ تولید شده با غلظت واکنشگر مورد نظر ارتباط مستقیم دارد و جهت بررسی سیستم های سوبسترا –آنزیم مورد استفاده از دستگاه های ELISA reader ، که اساس آنها اندازه گیری شدت نور جذب شده توسط محصول رنگی واکنش است بهره گرفته می شود.برای این منظور نور تک رنگی با طول موج معین به محصول تابانده ومیزان جذب آن اندازه گیری می شود.
(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت nefo.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

۳-۵-۱-۲- برخی مشکلات در الایزا :
برخی مشکلات شایع در الایزاعبارتند از:

1. 1. جذب پایین که سبب کاهش OD می شود ، در اثر موارد زیر ایجاد می شود:

• • خطا در پیپتاژ کردن یا عدم تقسیم صحیح

• • زمان انکوباسیون نادرست

• • ترکیب نادرست سوبستراها

• • انتخاب فیلتر اشتباه در دستگاه reader (طول موج ۴۵۰ nm برای TMB ،۴۹۰ nm برای OPD و۴۰۵ nm برای ABTS

• • تاریخ مصرف کونژوگه گذشته باشد و یا آلوده شدن عناصر و معرف ها

• • استفاده نادرست از معرف ها

1. 1. جذب بالا که سبب افزایش OD می شود در اثر عوامل زیر ایجاد می شود:

• • خطا در پیپتاژ کردن یا عدم نقسیم صحیح

• • شستشوی نادرست

• • انتخاب فیلتر اشتباه در دستگاه reader (طول موج ۴۵۰ nm برای TMB ،۴۹۰ nm برای OPD و۴۰۵ nm برای ABTS

• • آلودگی در بافرها یا سوبسترا –آنزیم

• • زمان انکوباسیون نادرست

• • تاریخ مصرف کونژوگه گذشته باشد و یا آلوده شدن عناصر و معرف ها

1. 1. اگر همه چاهک ها مثبت خوانده شوند، در اثر موارد زیر ایجاد می شود:

• • آلودگی در بافرها یا سوبسترا –آنزیم

• • خطا در پیپتاژ کردن یا عدم تقسیم صحیح

• • تاریخ مصرف کونژوگه گذشته باشد و یا آلوده شدن عناصر و معرف ها

• • شستشوی ناکافی

1. 1. اگر همه چاهک ها منفی خوانده شوند، در اثر موارد زیر ایجاد می شود:

• • کار مرحله به مرحله صورت نگیرد

• • آلودگی در بافرها یا سوبسترا –آنزیم

• • آلودگی محلول کونژوگه

۳-۶- بررسی پتانسیل PUET-GRA7 و PUET-GRA6 در تشخیص عفونت حاد و مزمن توکسوپلاسموز با روش الایزا
در این تحقیق میزان آنتی بادی تولید شده علیه GRA7 و GRA6 بطور جداگانه در سرم افراد دارای عفونت حاد و مزمن ارزیابی شد ، سپس پتانسیل GRA7 و GRA6 در تشخیص عفونت حاد و مزمن بررسی گردید.
۳-۶-۱- برقراری شرایط الایزا
جهت برقراری شرایط الایزا پارامتر های زیر بررسی گردید و بهترین شرایط برای ایجاد اختلاف بین OD های سرمهای مثبت و منفی انتخاب شد .
پارامترهای بررسی شده عبارتند از :