۱۸g/ml

۱۹g/ml

۴-۷- کونژوگاسیون PRP با اگزوتوکسینA سودوموناس آئروژینوزا :
برای تخلیص کونژوگه‌ی PRP-ETA آن را از ستون کروماتوگرافی ۴B-CL به روش ژل فیلتراسیون عبور داده و جذب نوری فرکشن‌های مختلف را در طول موج ۲۶۰ و۲۸۰ نانومتر قرائت شد. همان طور که درنمودار ۵-۶ مشاهده می‌شود، قله‌ی اول مربوط به کونژوگه‌ی PRP-ETA می‌باشد که نشان دهنده‌ی کونژوگه شدن کپسول پلی ساکاریدی PRP با کریر پروتئینی (اگزوتوکسینA) می‌باشد، قله‌ی دوم هم نشان دهنده پروتئین‌های غیر کونژوگه می‌باشد.

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

نمودار ۴-۶-منحنی OD فرکشن های کونژوگه
۴-۸- بازده کونژوگاسیون PRP-ETA :
مطابق نتایج بدست آمده با برسی نسبت پروتئین کونژوگه به پروتئین اولیه در مولکول کونژوگه PRP + ETA ، بازده کونژوگاسیون۳۰ درصد محاسبه گردید
۴-۹- کنترل پیروژنی :
کونژوگه PRP-ETA تحت آزمون تب زایی در خرگوش قرار گرفت و بعد از ۲۴ ساعت هیچ گونه افزایش درجه حرارت در خرگوش ها مشاهده نشد. بنابراین نمونه های کونژوگه تهیه شده عاری از هر گونه ماده تب زا بوده و قابل تزریق بودند.
۴-۱۰- کنترل توکسیسیتی غیر عادی در موش سوری:
عدم مشاهده هرگونه عوارض جانبی نظیر کاهش وزن،التهاب موضعی و مرگ و میر در موش ها حاکی از آن بود که نمونه های کونژوگه غیر سمی و قابل تزریق بودند.
۴-۱۱- آزمون ایمونوژل دیفیوژن :
این آزمایش جهت اطمینان از اتصال آنتی ژن پلی ساکارید PRP به اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزا انجام گرفت. برای این منظور ایجاد خطوط رسوبی در اثر واکنش های آنتی ژن با آنتی بادی مورد بررسی قرار گرفت و نتایج نشان داد که مولکول کونژوگه تهیه شده توانایی انجام واکنش با آنتی سرم PRP وآنتی سرم ETA را دارا بود.
شکل ۵-۵- آزمون ایمونوژل دیفیوژن.
Double immunodiffusion in 1% agarose. 1. PRP-ETA conjugate.2. PRP. 3. ETA antiserum.4. PRP-ETA antiserum (animal serum).5. PRP monospecific antiserum 6. Polysaccharide of Naiseria meningitides type A as negative control
۴-۱۲- الکتروفورز (SDS-PAGE) برای بررسی وزن مولکولی :
نتایج SDS-PAGE برای بررسیPRP-ETA و ETA به ترتیب در شکل… نشان داده شده است. رنگ آمیزی ژل با بهره گرفتن از محلول کوماسی بلو ۲۵۰-G با حساسیت ۳۰-۲۰ نانوگرم با هدف تعیین حضور باند های پروتئین صورت می گیرد.
شکل ۴-۶- الکتروفورز (SDS-PAGE) برای PRP-ETA و ETA
۴-۱۳- ارزیابی فعالیت باکتری کشی سرم حیوان واکسینه شده
از آنجایی که بررسی فعالیت باکتریسیدالی سرم یکی از مهمترین آزمون های ایمونولوژیکی واکسن ها است، آزمایش فوق به صورت کمی روی نمونه های سرمی حیوانات ایمن شده با واکسن کونژوگه (PRP-ETA) و PRP هموفیلوس آنفولانزای تیپb انجام گرفت. نتیجه آزمون SBA برعلیه هموفیلوس آنفولانزای تیپb سیر صعودی در القاء آنتی بادی تا روز ۴۵ را نشان می دهد .
در تزریق دوم کونژوگه (PRP-ETA) که به گروه دوم تزریق شد طبق جدول ۴-۶ نتایج نشان می دهد، توانایی القاء سنتز آنتی بادی باکتریسیدالی را در حیوان ایمن شده بعد از اولین تزریق داشته و تزریق دوم در روز ۱۵ باعث القا سطح بالایی از آنتی بادی باکتریسیدال در این گروه برعلیه هموفیلوس آنفولانزای تیپb می شود. و نتیجه آزمون SBA حاکی از سیر صعودی در عیار سنتز آنتی بادی تا روز ۴۵ را نشان می دهد و میانگین این افزایش از میانگین نتایج در گروه اول به میزان محسوسی بالاتر است.
نتایج آزمون T-test نشان دهنده اختـلاف معنـی داری در میانگیـن عیـار آنتی بادی تولید شده در دو گروه است( ۰۵/۰ P <).
جدول ۴-۵- عیـار آنتی بادی
درصد حفاظت بخشی کونژوگه (PRP-ETA) نسبت به PRP خالص
١) درصد ایمنی کونژوگه (PRP-ETA)
٢)در صد ایمنی زایی خالص PRP
جدول ۴-۶- تیتر آنتی بادی باکتری کش واکسن کونژوگه (PRP-ETA) و PRP در روزهای ۱۵،۳۰، ۴۵

تیتر باکتری کشی IgG تولید شده علیه PRP و PRP-ETA در روزهای ۱۵،۳۰، ۴۵

۱

رقت

تعداد کلنی ها

(-)

(-)

(-)

(-)